一、母种制作技术
一般处于保存期的大球盖菇菌种的菌丝处在缓慢生长或停止生产状态，所以在制作生产用的母种前，必须对保存的菌种进行复壮，以便将处于旺盛生长状态的菌种接入母种或原种培养基上，促进菌丝快速生长，获得菌丝粗壮、浓白、生长势旺的菌种。
1．培养基配方：I号：PDA(马铃薯200g、葡萄糖18g、琼脂18g、水1000m1)。Ⅱ号：PDA+硫酸镁1．5g+磷酸二氢钾3g+蛋白胨2g、水1000ml。Ⅲ号：马铃薯100g、干杂木屑100g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。
上述配方的培养基经高压20分钟灭菌消毒后制成试管斜面，3天内用完。
2．制作方法：通过组织分离技术，将选取的大球盖菇组织块接入I号培养基上(或接入需复壮的保存种)。在24–28℃条件下经10–15天培养，菌丝长至试管1／3–1／4时，挑取菌丝扩展前端浓密、粗壮的部分转入Ⅱ号或Ⅲ号培养基上，采用两点接种法，以使菌丝迅速长满培养基表面(一般15–20天)提高菌丝的质量。经Ⅱ号、Ⅲ号复壮培养基培养的菌丝表现为浓白、粗壮、生命力强，以利原种菌丝的生长，缩短原种培养时间，提高成品率。
二、原种及生产种制作
1．配方：I号：小麦或大麦88％、米糠或麦麸10％、石膏或碳酸钙1％、石灰0．5％、含水量65％(加入米糠或麸皮主要是使培养基疏松，增加透气性，菌丝走向好)。Ⅱ号：小麦25％、稻草64％、麦麸10％、石膏粉1％、含水量65％–70％。Ⅲ号：杂木屑42％、杂刨木花42％、米糠或麦麸15％、硫酸镁0．2％、石膏或碳酸钙1％、含水量70％。
以上配方在1．3–1．5kg／平方米压力下，消毒2–2．5小时，3天内用完。
2．原料选择和配制：实践证明：制作大球盖菇原种和生产种的培养基主原料以麦粒最好，木屑、刨木花次之，稻草最差。
(1)麦粒的选择：应选深黄或暗红色皮韧性大、浸泡时不易破皮的麦粒为好，从吸水率来看大麦优于小麦。
(2)浸泡：浸泡分石灰水浸泡和清水浸泡预煮后加石灰两种方法。前者用1％石灰水浸泡，pH值9–10，在25℃小麦浸泡8–9小时，大麦浸泡9–10小时，夏季水温高应适当缩短时间。浸泡好的小麦粒，用手指甲掐麦粒凹陷，有较强的弹性，指甲印很快消失为宜。后者用清水先浸麦粒，时间与上相同。浸好的麦粒涝起用清水冲洗后沥干，放入锅内煮至刚沸为止涝起凉开，加入铺料混合，用0．5％石灰调pH6．5左右，含水量65％。
(3)装瓶及消毒：选用容积700ml，瓶口内径为3cm左右的浅白色耐高温玻璃瓶(不宜用广口瓶，以免杂菌侵入)，将配好混匀的培养料装入瓶中，每瓶装200–300g为宜，在1．3–1．5kg／平方米压力下消毒2–2．5小时，切忌消毒时间过长以免麦粒呈糊状，导致透气性和养分下降，影响菌丝生长。
(4)接种和培养：采取多点式接种，即在瓶内培养料四周按适当的距离接种3–4点，料面上再接小块菌种，在24–28℃条件下，暗培养7–10天，菌丝萌发生长至直径4cm左右的菌斑时，立刻对菌丝进行人工搅拌，搅拌时接种点的菌丝被搅断受刺激，同时由于开瓶口(在超净台上进行)实际上给菌丝起增氧作用，有利于菌丝迅速生长，一般整个培养过程需25–30天可长满瓶。
3．生产种制作：
(1)配方、培养基制作、瓶子选择和消毒与原种相同
(2)接种：将长满瓶的原种接种到生产培养基表面上，尽量铺满料面，以免杂菌污染，每瓶原种接不超过30瓶生产种，在24–28℃条件下培养7–10天菌丝萌发生长至洁白、浓密粗壮时，对菌丝进行人工搅拌，搅断菌丝，刺激其快速生长，一般20–25天长满全瓶。